مرجع تخصصی آب و فاضلاب

درحال مشاهده: مرجع تخصصی آب و فاضلاب | اصطلاحات و تعاریف

ادعونی اهدای خون

اصطلاحات و تعاریف در آزمایشگاه میکروبیولوژی

۱۳۹۵/۱۲/۲۷

17:13

امیرحسین ستوده بیدختی

اصطلاحات و تعاریف در آزمایشگاه میکروبیولوژی
کلیفرم ها
گروهی از باکتری های هوازی و بی هوازی اختیاری ، گرم منفی ، میله ای شکل و بدون اسپور هستند که قادرند در شرایط هوازی در محیط های کشت انتخابی لاکتوزدار در دمای ۵/۰ ± ۳۵ درجه سلسیوس در مدت ۲۴ تا ۴۸ ساعت تولید اسید و گاز کنند .
اساس روش
این روش براساس تلقیح حجم معینی از نمونه آب به محیط انتخابی لاکتوز دار و گرمخانه گذاری در دمای ۵/۰ ± ۳۵ درجه سلسیوس انجام می پذیرد . سپس با استفاده از محیط های کشت انتخابی و تائیدی ، وجود کلیفرم ها تائید می شود .
نمونه برداری
دست کم ۵۰۰ میلی لیتر آب را ( طبق استاندارد ملی ۴۲۰۸ ) سال ۱۳۷۶ آئین کار نمونه برداری از آب جهت آزمونهای باکتریولوژی نمونه برداری کنید .
مواد لازم
محیط های کشت
آبگوشت P-A 1
ترکیبات                        مقدار (غلضت معمولی )          مقدار (غلضت سه برابر )
عصاره گوشت گوساله                       ۳ گرم                               ۹ گرم
پپتون                                            ۵ گرم                                 ۱۵ گرم
لاکتوز                                           ۴۶/۷ گرم                      ۳۸/۲۲ گرم
تریپتوز                                          ۸/۹ گرم                   ۴۹/ ۲۹ گرم
دی پتاسیم هیدروژن فسفات              ۳۵/۱ گرم                           ۰۵/۴ گرم
منوپتاسیم هیدرژن فسفات                ۳۵/۱ گرم                          ۰۵/۴ گرم
کلرید سدیم                                      ۴۶/۲ گرم                         ۳۸/۷ گرم
لوریل سولفات سدیم                         ۰۵/۰ گرم                         ۱۵/۰ گرم
بروموکروزول ارغوانی                     ۰۰۸۵/۰ گرم                      ۰۲۵۵/۰ گرم
آب مقطر                                    ۱۰۰۰ میلی لیتر                   ۱۰۰۰ میلی لیتر
طرز تهیه :
ترکیبات فوق را با جوشاندن در آب مقطر حل نمائید . سپس به حجم های ۵۰ میلی لیتر در ظروف شیشه ای با گنجایش ۲۵۰ میلی لیتری ریخته ، و در اتوکلاو با دمای ۱ ± ۱۲۱ درجه سلسیوس به مدت ۱۲ دقیقه سترون کنید .pH نهایی محیط باید ۲/۰± ۸/۶ باشد.

۷-۱-۲    آبگوشت لاکتور – صفرا – سبز درخشان
ترکیبات                        مقدار
پپتون                              ۱۰ گرم
لاکتوز                              ۱۰ گرم
پودر صفرای گاوی                    ۲۰ گرم
سبز درخشان                         ۱۳ میلی لیتر
آب مقطر                        ۱۰۰۰ میلی لیتر
طرز تهیه :
پپتون را در ۵۰۰ میلی لیتر آب مقطر حل کنید . سپس ۲۰ گرم صفرای گاوی را که در ۲۰۰ میلی لیتر آب مقطر جداگانه حل نموده اید ، به آن اضافه کنید . pH این محلول باید برابر ۵/۰± ۷ باشد.حجم محلول فوق را با آب مقطر به ۹۷۵ میلی لیتر رسانده و پس از افزودن لاکتوز به آن ، pH را برابر ۴/۷ تنظیم کنید . محلول سبز درخشان را به آن افزوده و با آب مقطر به حجم ۱۰۰۰ میلی لیتر برسانید . سپس در لوله های حاوی دورهام به حجم های ۵ میلی لیتری ریخته و در اتوکلاو با دمای ۱۱۵ درجه سلسیوس به مدت ۱۰ دقیقه سترون کنید .
یادآوری : چنانچه محیط های کشت به صورت تجارتی دردسترس باشد ، طبق دستورالعمل سازنده انجام دهید .
   آبگوشت لوریل تریپتوز ( باغلظت مضاعف )
تریپتوز                        ۴۰ گرم
لاکتوز                          ۱۰ گرم
کلرید سدیم                      ۱۰ گرم
دی پتاسیم هیدروژن فسفات                            ۵/۵ گرم
پتاسیم دی هیدروژن فسفات            ۵/۵ گرم
لوریل سولفات سدیم                                        ۲/۰ گرم
آب مقطر                                                 ۱۰۰۰ میلی لیتر
طرز تهیه :
تریپتوز ، لاکتور ، کلرید سدیم و دی پتاسیم هیدروژن فسفات را به آب مقطر اضافه کرده و حرارت دهید تا حل شوند . سپس لوریل سولفات سدیم را به آن افزوده و به آرامی تکان دهید به گونه ای که کف نکند . pH را برابر ۲/۰ ± ۸/۶ تنظیم نمائید و در حجم های ۱۰ و ۵۰ میلی لیتری در لوله های حاوی دورهام تقسیم نموده و در اتوکلاو با دمای ۳ ± ۱۱۵ درجه سلسیوس به مدت ۱۰ دقیقه سترون کنید.
     وسایل لازم
از وسایل معمول در آزمایشگاه میکروب شناسی (طبق استاندارد ملی ۲۷۴۷ ) سال ۱۳۸۰ آئین کار در آزمایشگاه میکروب شناسی استفاده کنید .
      روش اجرای آزمون
     تلقیح نمونه
نمونه مورد آزمــون را به مــدت ۵ ثانــیه بشدت تکان دهید. سپس ۱۰۰ میلی لیتر از آن را به ۵۰ میلی لیتر محیط کشت آبگوشت P-A بند ۷-۱-۱ با غلظت سه برابر تلقیح نموده و پس از یکنواخت شدن ، در دمای ۵/۰ ± ۳۵ درجه سلسیوس به مدت ۲۴ تا ۴۸ ساعت گرمخانه گذاری نمائید .
    بررسی نمونه
نمونه تلقیح شده بند ۹-۱ را پس از پایان زمان گرمخانه گذاری بررسی کنید . مشاهده رنگ زرد در محیط کشت آبگوشت P-A نشانگر تخمیر لاکتوز و تولید اسید و گاز همچنین حباب گاز
است. که با تکان دادن ظرف به آرامی حباب گاز و کف را می توانید در سطح آن مشاهده کنید. تولید اسید و گاز نشانگر وجود احتمالی کلیفرم ها در نمونه مورد آزمون می باشد که برای تائید آن باید آزمون تائیدی انجام پذیرد .
۹-۳ آزمون تائیدی
برای تائید وجود کلیفرم ها ، با استفاده از حلقه کشت سترون ، از کشت بند ۹-۲ که تولید اسید و گاز نموده اند ، برداشت نموده و به محیط کشت آبگوشت لاکتوز – صفرا – سبز درخشان بند
-انتــقال داده و در دمای ۵/۰± ۳۵ درجه سلسیوس به مدت ۲۴ تا ۴۸ ساعت گرمخانه گذاری نمائید. مشاهده گاز و کف در محیط فوق ، نشانگر وجود باکتری های کلیفرم در نمونه مورد آزمون می باشد .
     بیان نتایج
نتایج را بصورت “” کلیفرم ها در ۱۰۰ میلی لیتر نمونه آب وجود دارد “” و یا “” کلیفرم ها در ۱۰۰ میلی لیتر نمونه آب وجود ندارد “” بیان کنید .
     گزارش آزمون
گزارش آزمون باید دارای آگاهی های زیر باشد :
۱ مشخصات کامل نمونه مانند ( نوع نمونه ، تاریخ و محل نمونه برداری ، تاریخ ارسال نمونه به آزمایشگاه )
۲ -روش آزمون طبق استاندارد ملی ……………….. .
-۳ بیان نتایج طبق بند ۱۰ این استاندارد
-۴ سایر اطلاعات که مرتبط با روش آزمون

مرجع تخصصی آب و فاضلاب

موضوعات مرتبط: میکروبیولوژی,تصفیه بیولوژیک و زیستی آب و فاضلاب

برچسب‌ها: اصطلاحات و تعاریف , آزمایشگاه میکروبیولوژی

ادامه مطلب

درحال مشاهده: مرجع تخصصی آب و فاضلاب | اصطلاحات و تعاریف

اصطلاحات و تعاریف در آزمایشگاه میکروبیولوژی

لیست مطالب

آرشیو موضوعی

برچسب ها

صفحات مهم

لینک دوستان

پیوندها

نویسندگان

آخرین مطالب

آرشیو